Применение пробиотика-гепатопротектора Биопротектин при токсических поражениях печени у собак
Т. В. Панина, Н. И. Малик, Б. В. Уша, Т. В Мацулевич ФГУ «ВГНКИ», МГУПБ, ЗАО «Партнер»
За последние годы в ветеринарии приобрела особую актуальность проблема роста патологий гепатобилиарной системы.
Современные экологические условия, увеличение интенсивности воздействия химико-физических и биологических факторов, а также чрезмерное назначение лекарственных препаратов, в том числе антибиотиков и гормонов, несбалансированное кормление создают предпосылки к росту гепатопатий.
При этом большая часть гепатобилиарных патологий этиологически и патогенетически взаимосвязана с желудочно-кишечными патологиями.
Доказано, что печень и микрофлора кишечника участвуют в процессах печеночнокишечной рециркуляции различных органических и неорганических соединений. Следовательно, печень и микрофлора пищеварительного тракта являются двумя взаимосвязанными детоксикационными системами организма.
При этом повреждение печеночных клеток, снижение их функциональной активности неизбежно ведет к увеличению воздействия токсических веществ на кишечную микрофлору, что может являться причиной нарушений микробиоценоза кишечника, в свою очередь, эти нарушения индуцируют детоксикационную функцию микрофлоры, тем самым, увеличивая токсическую нагрузку на печень.
Одним из перспективных направлений в комплексном решении проблемы печеночных и желудочно-кишечных патологий является создание новых комбинированных препаратов — пробиотиков-гепатопротекторов, использование которых способствует своевременной детоксикации организма, восстановлению гепатобилиарной и желудочно-кишечной систем, а также будет являться эффективным инструментом в компенсации патологии печени и нарушении микробиоценоза.
В настоящее время в нашей стране на рынке ветеринарных препаратов нет отечественных комбинированных препаратов, в состав которых входит композиция пробиотических штаммов и гепатопротективного компонента.
Целью наших исследований явилась разработка нового комплексного пробиотика-гепатопротектора, изучение его влияния на гепатобилиарную систему и восстановление микробиоценоза кишечника собак в комплексной терапии гепатитов.
Материалы и методы
Разработанный препарат пробиотик-гепатопротектор «Биопротектин»®, содержит очищенный сухой экстракт, получаемый из плодов расторопши пятнистой (Silybum marianum), и лиофилизированную массу живых антагонистически активных бактерий вида Bifidobacterium bifidum штамм № 1, Lactobacillus fermentum № 90Т-С4, иммобилизированных на лактулозе — синтетическом дисахариде и сорбированных на полисорбе.
Клинические испытания проведены на 48 собаках различных пород обоего пола. Для этого были сформированы три группы животных: по 10 собак в каждой, с разными весовыми категориями (до 5 кг, от 5 -10 кг, свыше 10 кг).
За клиническим состоянием животных вели наблюдения в течение 30 дней.
Исследования проб крови, а также проб фекалий животных проводили до применения препарата, затем на 3, 7,14 и 23 день исследований.
Оценку эффективности препарата «Биопротектин» проводили по результатам клинических наблюдений, биохимических и клинических анализов крови, а также по результатам бактериологических анализов проб фекалий собак. Влияние исследуемых препаратов на микробиоценоз кишечника оценивали по динамике формирования популяции бифидобактерий, лактобацилл, энтерококков и кишечной палочки, как наиболее индикаторных групп микроорганизмов нормофлоры кишечника.
Результаты исследований
Клинический осмотр животных выявил общее угнетенное состояние со сниженной динамической активностью. Во всех случаях наблюдалась брадикардия и полипное. В 89 % случаев были отмечены рвота и диарея. Наблюдали иктеричность слизистых оболочек ротовой полости и склер глаз у 65 %, а также выявляли болезненность при пальпации в области печени и гепатомегалию.
Исследования кишечного микробиоценоза собак с токсическим гепатитом, до применения препарата «Биопротектин» установили статистически достоверное (р<0,05) снижение количества лактозопозитивных эшерихий до показателя 5,56±0,19 lg КОЕ/г — у собак в первой группе; 6,02±0,49 lg КОЕ/г — во второй группе и 6,48±0,14 lg КОЕ/г — в третьей группе.
Количество выделенных эшерихий со сниженной ферментативной активностью составило 6,73±0,24 lg КОЕ/г у собак в первой группе; 7,03±0,20 lg КОЕ/г — во второй группе; 7,57±0,31 lg КОЕ/г — в третьей группе, сформированных для оценки терапевтической эффективности препарата «Биопротектин». Кроме того, полученные данные свидетельствуют о том, что при токсическом гепатите в пробах фекалий собак значительно увеличивается количество условно патогенных микроорганизмов, таких как сальмонеллы.
В кишечном микробиоценозе больных собак с большой долей достоверности (р<0,01) уровень энтерококков достигал значения 6,67±0,17 lg КОЕ/г в первой группе; 6,54± 0,09 lg КОЕ/г — во второй группе и 6,47±0,52 lg КОЕ/г — в третьей группе, а также 6,41±0,07 lg КОЕ/г; 7,01±0,07 lg КОЕ/г; 7,78±0,14 lg КОЕ/г. Фактор токсикоза вызвал незначительное увеличение популяционного уровня коагулазонегативных стафилококков до 3,66±0,16 lg КОЕ/г в первой группе, 4,16±0,18 lg КОЕ/г во второй группе и 4,22±0,28 lg КОЕ/г в третьей группе. Уровень лактобацилл у собак с токсической формой гепатита так же был занижен и составлял в первой группе 6,11±0,69 lg КОЕ/г, во второй — 6,81±0,31 lg КОЕ/г и в третьей — 6,29±061 lg КОЕ/г и, соответственно, уровень бифидобактерий составил в первой группе 7,48±0,04 lg КОЕ/г, 8,03±0,05 lg КОЕ/г — во второй группе и 8,42±0,32 lg КОЕ/г — в третьей группе.
Дрожжи были выделены так же у 100 % животных: 4,49±0,014 lg КОЕ/г — в первой группе; 4,77±0,43 lg КОЕ/г — во второй дгруппе и 4,54±0,09 lg КОЕ/г — в третьейгруппе , подобранных для испытаний с препаратом «Биопротектин»®. У собак всех групп при исследовании кишечного микробиоценоза до применения терапии были выделены микроорганизмы рода Протей. В опытной группе показатели составили 2,57±0,17 lg КОЕ/г в первой группе; 3,56±0,41 lg КОЕ/г — во второй группе и 3,82±0,04 lg КОЕ/г — в третьей группе.
Таким образом, характер изменения микроэкологии кишечника у собак с токсическим гепатитом свидетельствовал о наличие дисбактериоза.
Применение препарата «Биопротектин» на 7 день улучшило показатели микробиоценоза кишечника во всех группах исследуемых собак. Отмечена статистически достоверная тенденция к снижению количества условно патогенных микроорганизмов. Однако следует отметить, что препарат «Биопротектин» значительно повысил уровень энтерококков, лактобацилл и бифидобактерий, тогда как в группах с контрольным препаратом «Легалон» уровень пробиотичекой флоры увеличился незначительно.
Применение препарата «Биопротектин» на всех сроках исследований, начиная с 14 дня, значительно влияло на повышение уровня лактофлоры и бифидобактерий, при этом популяционный уровень лактобацилл и бифидобактерий увеличился и достиг показателей нормобиоза.
На фоне увеличения пула пробиотической флоры было отмечено статистически достоверное снижение уровня условно патогенных микроорганизмов уже через 14 дней применения препарата «Биопротектин».
Результаты биохимических исследований крови собак. показали явные отклонения от нормы в сторону увеличения по показателям АлАт, АсАт, холестерина, общего билирубина, щелочной фосфатазы, ЛДГ, общего белка, альбумина, глобулинов.
Так, показатели АлАт у собак в опытной группе варьировали от 88,24±0,03 до 96,66±0,03 МЕ/л, при этом показатель АсАт варьировал от 85,10±0,01 до 111,20±0,03 МЕ/л.
Концентрация ЛДГ составляла 165,10±0,01 Е/л; 171,50±0,02 Е/л; 160,20±0,04 Е/л, а щелочной фосфатазы 77,30±0,4 МЕ/л; 82,10±0,3 МЕ/л; 93,30±0,06 МЕ/л в. Показатели общего билирубина превышала норму и составили 3,83±0,02 мкмоль/л; 4,10±0,02 мкмоль/л; 3,60±0,03 мкмоль/л. Показатели холестерина также были выше нормы и составили 10,60±0,03 ммоль/л; 9,90±0,01 ммоль/л; 10,20±0,03 ммоль/л, при этом показатель глюкозы превысил нормативный показатель лишь в одном случае в опытной группе, что составило 6,43±0,01 ммоль/л.
Количество общего белка варьировало от 73,60±0,30 до 75,60±0,20 г/л.
Влияние препарата «Биопротектин» на биохимические показатели крови в сторону улучшения были зарегистрированы у собак во всех группах.
При этом щелочная фосфатаза и ЛДГ имели тенденцию к снижению уже на 7 день терапии, тогда как показатели АлАт и АсАт оставались на прежнем уровне.
Наиболее заметные изменения имели место при применении препарата «Биопротектин» в комплексной терапии гепатитов на 23 день. Показатели белка, билирубина, и индикаторных ферментов АлАт и АсАт, ЛДГ, ЩФ и холестерина приблизились к норме.
При оценке Функции гепатобилиарной системы собак с токсическим гепатитом по клиническому анализу крови во всех случаях было зафиксировано значение гематокрита в опытных группах 44,20±0,30 %; 43,50±0,05 %; 44,80±0,30 %. Показатели гемоглобина составили 9,60±0,02 г/дл; 11,50±0,05 г/дл; 10,20±0,40 г/дл, что ниже нормативного показателя.
Кроме того, у больных собак было зафиксировано повышение СОЭ до показателей: 9,00±0,60 мм/ч; 8,26±0,90 мм/ч; 13,10±0,90 мм/ч. При этом значения показателей лейкоцитов находились в пределах физиологической нормы.
Анализ лейкограммы у собак, больных токсическим гепатитом, выявил отклонение от физиологической нормы. Так, например, палочкоядерные нейтрофилы составляли 6,50±0,03%; 3,50±0,005%; 4,00±0,02%, что превышает физиологическую норму. Относительное количество сегментоядерных нейтрофилов составляло 36,20±0,03%; 36,10±0,02%; 32,80±0,20%, находясь в пределах нормы так же, как эозинофилы и моноциты. Следует отметить, что показатели базофилов и юных нейтрофилов незначительно завышали верхние границы нормы.
Влияние препарата «Биопротектин» на восстановление морфологических показателей крови собак. На 3 день во всех группах, не показали существенных изменений, что связано, вероятно, с высокой степенью интоксикации организма животных.
Однако уже на 7 день комплексной терапии нами было отмечено увеличение гематокрита и гемоглобина. При этом уровень СОЭ и лейкоцитов во всех группах с препаратом «Биопротектин» находился в пределах нормы.
К 23 дню терапии наблюдалась положительная динамика восстановления показателей крови животных во всех группах.
Таким образом, применение препарата «Биопротектин» имело положительный эффект, при этом следует отметить, что восстановление клинических показателей крови животных к концу срока исследования.
Выводы
Нами установлено, что применение препарата «Биопротектин» в комплексной терапии токсических гепатитов у собак способствует восстановлению микробиоценоза кишечника за счет повышения популяционного уровня бифидобактерий с 7,48±0,04 lg КОЕ/г; 8,030±0,005 lg КОЕ/г; 8,42±0,32 lg КОЕ/г до 8,96±0,16 lg КОЕ/г; 9,03±0,05 lg КОЕ/г; 9,51±0,10 lg КОЕ/г и лактобацилл с 6,11±0,69 lg КОЕ/г; 6,81±0,32 lg КОЕ/г; 6,29±0,61 lg КОЕ/г до 7,82±0,07 lg КОЕ/г; 7,99±0,51 lg КОЕ/г; 8,01±0,18 lg КОЕ/г соответственно, а также снижения интенсивности колонизации кишечника условно патогенными микроорганизмами; обеспечивает восстановление биохимических показателей крови, что проявляется позитивной тенденцией развития активности гепатоэнзимов АлАт и АсАт и ЛДГ, нормализацией активности щелочной фосфатазы до пределов физиологической нормы, следствием чего является стабилизация физиологического состояния и увеличение массы тела животного. Эффективность терапии обусловлена более быстрой дезинтоксикацией и регенерацией гепатоцитов за счет двойного действия препарата, как на гастроинтестинальную, так и на гепатобилиарную системы.
SUMMARY
APPLICATION OF PROBIOTIK- GEPATOPROTEKTOR «BIOPROTECTIN» AT TOXIC DEFEATS OF LIVER AT DOGS.V. Panina, N.I.Malik, В. V. Usha, T. V. Matsulevich
FGI “VGNKI”, MSAAB, Joint-Stock Company ‘’Partner»
During the last years in veterinary science the problem of growth of pathologies of hepatobilliary system has got a special urgency.
Modem ecological conditions, increase in intensity of influence of chemical, physical and biological factors, and also excessive prescription of medicines, including antibiotics and hormones, imbalanced feeding create preconditions to pathological growth.
One of perspective directions in the complex decision of a problem of hepatic and gastroenteric pathologies is creation of the new combined complex — probiotik-gepatoprotektor. Application of a complex — probiotik — gepatoprotektor -preparation «Bioprotektin» in complex therapy of toxic hepatitises at dogs promotes restoration of intestinal microbiota and also decrease in intensity of colonisation of intestines by conditionally pathogenic microorganisms; provides restoration of biochemical indicators of blood that is shown by the positive tendency of development of enzymes to limits of physiological norm.
Efficiency of therapy is caused by faster detoxication and hepatic cells regeneration at the expense of double action of a preparation, both on gasrtointestinal, and on hepatobilliary systems.