Гельминтокопроскопия (от греческого слова helmins – червь, kopros – кал, навоз, skopeo – смотрю) – совокупность методов взятия, обработки и исследования проб фекалий животных и человека с целью обнаружения в них яиц, личинок гельминтов или же самих паразитов, их фрагментов (членики, отрезки) и постановки диагноза.
Методы исследования направленные на отыскание самих паразитов и их отдельных фрагментов называется гельминтоскопией. Яйца гельминтов обнаруживают гельминтоовоскопическими, а личинок гельминтоларвосколическими методами
1. Порядок взятия и доставки материала для исследований
Фекалии у животных берут либо из прямой кишки, либо с земли (или пола) в зависимости от вида гельминта в количестве 4-10 г. При взятии их из прямой кишки на руки надевают тонкие резиновые перчатки или напальчники. При исследовании на кишечные стронгилятозы и легочные гельминты (особенно при диктиокаулезе) фекалии нужно брать только из прямой кишки во избежание загрязнения исследуемого материала личинками свободно живущих гельминтов. Допустимо отбирать пробы с пола, когда исследования проводят на заболевания, при которых го яиц не выходят личинки (фасциолез, дикроцелиоз, мониезиозы, аскаридиозы и т.д.).
У крупного рогатого скота, лошадей, собак фекалии берут индивидуально, указывая кличку и номер животного. У свиней, овец, оленей, кроликов и пушных зверей не всегда удается индивидуальное взятие проб, у этих животных фекалии чаще берут групповым методом, при этом указывают группу, отару, № станка и клетки.
Исследуют не менее 10% животных отары, фермы, хозяйства. Доставляют пробы фекалии в стеклянной, пластмассовой таре, целлофановых мешочках или пергаментной бумаге с обязательной описью проб в сопроводительном документе. При этом указывают, хозяйство, отделение, бригаду, участок, ферму, вид животного, их возраст, на какие гельминты исследовать, дату взятия и направления материала. Клички, номера животных, станка, клетки должны соответствовать номеру пробы фекалий на упаковке.
2. Методы гельминтоскопии
Гельминтоскопию применяют для обнаружения в исследуемом материале половозрелых и юных гельминтов или их фрагментов. Гельминты нередко отходят сами. А у цестод некоторых групп систематически отторгаются членики и фрагменты (отрезки) стробилы с яйцами и выделяются наружу. Исследуя фекалии животных невооруженным глазом можно заметить гельминтов или их фрагменты и членики, а иногда приходится использовать специальные методы исследования.
Особое значение гельминтоскопия имеет при цестодозах, а также при диагностической дегельминтизации.
С целью обнаружения члеников имагинальных цестод осматривают свежие фекалии. У овец, северных оленей, телят, лошадей члеников цестод нетрудно заметить при обычном осмотре. В фекалиях ягнят и овец рано утром или после дневного отдыха находят членики мониезий, тизакиезий, аветеллин и стилезий. У плотоядных животных членики цестод из отряда тениата способны активно передвигаться во внешней среде. Поэтому необходимо осматривать свежие фекалии.
Весьма характерны по форме членики огуречного цепня ( Dipylidium caninum ) паразитирующий у собак, лисиц, песцов, енотовидных собак, кошек и других плотоядных, а также у человека. Членики этого паразита внешне напоминают огуречные семена, их легко заметить в фекалиях, выделенных инвазированными животными.
Из специальных методов гельминтоскопии практически прост и приемлем метод последовательного промывания.
2.1. Метод последовательного промывания
При проведения этого метода собирают свежие порции фекалий от животных, их кладут в сосуд, заливают водой в соотношении 1:5 и 1:10, тщательно перемешивают. Взвесь оставляют на 5 мин. для осаждения. Затем верхний слой сливают до осадка, после чего снова заливают водой и повторяют эти операции до тех пор, пока жидкость над осадком не будет прозрачной. После надосадочную жидкость сливают последний раз, а осадок помещают в кювет или чашку Петри для исследования под лупой. Так как одни гельминты хорошо видны на белом фоне, а другие на черном, то для более полной выборки гельминтов чашку Петри ставят то на белую, то на черную бумагу. Гельминты выбирают препаровальной иглой или кисточкой, а затем микроскопируют для установления вида, при этом пользуются ручной, а также штативной лупой или стереоскопическим микроскопом.
2.2. Метод отсеивания
При этом методе используют набор из 2 – 4 металлических сит с отверстиями убывающего диаметра. Струей воды промывают фекалии, при этом частицы фекалий уносятся водой, а гельминты в зависимости 6 v величины задерживаются на разных ситах. Затем гельминтов выбирают и исследуют. Этим методом можно собрать гельминтов разной величины
3. Методы гельминтоовоскопии
Гельминтоовоскопия (от латинского ovum – яйцо, греческого skopeo – смотрю) объединяет группу методов исследования, с помощью которых выявляют яйца возбудителей гельминтозов.
Предложено много методов овоскопии. Но не все они заслуживают практического внимания: одни сложны по технике выполнения, при исследовании другими требуется значительное время, третьи малоэффективны. В данной работе мы приведем только те методы, которые заслуживают практического внимания.
Удельный вес яиц тяжелее обычной воды, вследствие этого яйца гельминтов, как более тяжелые частички вымываются из фекалий водой и оседают на дно сосуда с различной скоростью, в зависимости от удельного веса, Быстрее всего оседают яйца более крупного размера.
В растворах же солей высокого удельного веса яйца гельминтов наоборот всплывают (явление флотации) в верхний слой и концентрируются в нем.
На использовании этих физических закономерностей основала технология всех современных методов гельминтоовоскопии, которые подразделяются на три группы:
а) Методы осаждения (седиментации) яиц гельминтов;
б) Методы флотации яиц гельминтов;
в) Комбинированные методы (осаждения и флотации) яиц гельминтов.
3.1. Методы осаждения (седиментации)
Основаны на принципе осаждения взвешенных в жидкости яиц гельминтов, промывки осадка и исследования его. Эти методы применяются в основном для диагностики тех гельминтозов, возбудители которых выделяют яйца с высоким удельным весом (фасциолез, дикроцелиоз, парамфистоматоз, описторхоз и др.). Методики осаждения менее эффективны и более трудоемки, чем флотации. Это связано со сложностью отыскания яиц гельминтов в осадке взвеси.
3.1.1 . Метод последовательных смывов
Пробу фекалий весом 3-5 г кладут в стакан, вливают небольшое количество воды и размешивают палочкой или пинцетом до получения жидкой кашицеобразной массы, затем добавляют воду порциями до объема 50 мл при постоянном размешивании; После взвесь процеживают через металлическое сито или марлю в другой стакан, в нем отстаивают в течение 5-10 мин. Затем верхний слой жидкости над осадком сливают, а к осадку добавляют новую порцию воды и вновь отстаивают в течение 5 – 10 мин. Описанная процедура повторяется до тех-пор, пока вода не станет прозрачной. Ее в последний раз сливают, а осадок (около 5 мл) разливают на предметные стекла или стекла большего размера (12×19) и микроскопирутот.
Эта методика широко применяется в ветеринарных лабораториях для диагностики фасциолеза, дикроцелиоза, парамфистоматоза, эуриггрематоза и других гельминтозов жвачных. Вместе с тем, она трудоемка и по диагностической эффективности значительно уступает специальным флотационным и комбинированным методам гельминтоовоскопии.
3.1.2. Метод Горшкова.
Этот метод предложен ял я диагностики драйшеоза и габромематоза лошадей. Основан на принципе осаждения и концентрации яиц 150-30° г фекалий помещают на металлическом сите или марле в большую воронку с верхним диаметром 15-20 см. Предварительно на нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10-15 см с зажимом на конце. Воронку укрепляют в штативе. Фекалии разрыхляют, заливают доверху теплой водой (38 – 39°С) и выдерживают 4-24 часа. Затем зажим осторожно открывают, и жидкость выпускают в центрифужную пробирку и центрифугируют при 1500 об/мин, в течение 3-х мин. Верхний слой жидкости сливают, а осадок наносят на предметное стекло и микроскопируют.
3.1.3. Метод соскоба с перианальных складок
Эту методику применяют для диагностики оксиуроза лошадей и пассалуроза кроликов. Из деревянной палочки или щепочки делают лопаточки (можно и спички), смачивают смесью глицерина с водой (1:1) и делают соскоб с перианальных складок с внутренней стороны хвоста в области промежности. Соскоб переносят на предметное стекло с указанной смесью, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом.
3.2. Флотационные методы
Все методы флотации (от англ. Flotation — всплывание) основаны на единой физической закономерности, обеспечивающей всплытие яиц гельминтов в насыщенных, растворах солей. Для этого рекомендуются растворы различных солей, но предпочтительнее дешевых и повсеместно доступных.
Отдельные методы флотации называются по именам авторов, впервые предложивших ту или иную соль для приготовления флотационной жидкости.
3.2.1. Метод Фюллёборна
Для этой методики нужен насыщенный раствор поваренной соли, который готовят путем кипячения 400-420 г соли на 1 л воды.
Пробу фекалий весом 3 – 5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или марлю в один спой в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40-60 мин., затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопирования.
Этот метод в отечественной лабораторной практике может применяться для диагностики аскаридоза, стронгилятозов и стронгилоидоза свиней, неоаскаридоза, стронгилятозов стронгилоидозов, мониезиоза,. тизанизиоза, жвачных, параскаридоза, стронгилятозов кишечника лошадей
Плотность насыщенного раствора поваренной соли невысокая — 1,18-1,20. Тогда как удельный вес яиц аскариса равен 1,10-1,14 : а у неоплодотворенных яиц — 1,26, а трихоцефалюса — 1,16-1,22. Поэтому насыщенный раствор поваренной соли способен флотировать только масть яиц аскарид и трихоцефалюсов, по этой причине диагностическая эффективность данной методики невысокая. Кроме того, раствор на предметном стекле быстро кристаллизуется.
3.2.2. Метод Котельникона-Хренова с аммиачной селитрой
Технология этого метода такая же, как и метода Фюллёборна, но в качестве флотационной жидкости применяется нитрат аммония (техническая гранулированная аммиачная селитра) используемый для удобрений. При приготовлении флотационной жидкости на 1 л кипящей воды растворяют 1,5 кг селитры. Плотность раствора — 1,32. Поверхностную пленку можно микроскопировать через 10 мин.
Данная методика обладает высокой диагностической эффективностью. Кроме того, гранулированная аммиачная селитра, применяемая для флотационного раствора — общедоступная дешевая соль и производится в огромном количестве как минеральное удобрение.
В лабораторной практике эта методика широко применяется для выявления яиц аскаридоза, трихоцефалеза, эзофагостомоза и метастронгилеза свиней, неоаскарндоза, стронгилятозов пищеварительного тракта, трихоцефалеза, авителлиноза жвачных, параскаридоза и стронгилятозов лошадей, токсокароза и токсаскаридоза собак, кошек, песцов, лисиц и других плотоядных, стронгилоидоза животных разных видов, аскаридиоза и гетеракидоза кур.
Недостатком этого метода является то, что флотационная жидкость из аммиачной селитры не способна поднять тяжелые яйца трематод (фасциол, парамфистом, описторхисов и др.), т.к. удельный вес этих яиц больше чем 1,3 и раствор быстро кристаллизуется.
3.2.3. Метод Котельникова-Хренова с нитратом свинца
Техника проведения этого метода аналогична методу Фюллёборна. В качестве флотационной жидкости при этом используется насыщенный раствор нитрата свинца из расчета 0,65 кг на 1 л воды. Плотность этой жидкости достигает 1,5. Применение такого флотационного раствора дает возможность диагностировать широкий круг возбудителей гельминтозов и
с его помощью легко выявляются и тяжелые яйла фасциол (удельный вес 1,31-1,35), парамфистоматат (1,33-1,38), дикроцелиумов (1,3) и еще быстрее яйца с меньшим удельным весом, аскаридат, стронгилят, метастронгилюсов, трихоцефалят, стронгилоидесов, аноплоцефаяят (мониезий), тениат, скребней (макраканторинхусов), а также капсулы тизаниезий.
Недостатком данной методики является дороговизна нитрата свинца. Вместе с тем, при работе данным препаратом петли покрываются белым налетом, (нитрат свинца входит в химическую реакцию с металлами), яйца трематод сильно деформируются, что создает определенные трудности при исследовании. Кроме того, используемый препарат соль тяжелого металла — свинца, который является высокоядовитым веществом, что создает опасность для здоровья исследователей и окружающих, отработанные растворы данного препарата запрещено сливать в канализационные стоки. По совокупности этих причин, указанная методика не нашла широкого применения в практике.
Кроме того, в качестве флотационных жидкостей авторами были предложены насыщенные растворы из следующих солей: нитрата натрия — 1 кг препарата на 1 л воды, р — 1,38 (метод Калантаряна), тиосульфата натрия — 1,75 кг препарата на 1 л воды, р — 1,40 (метод Болховитинова), карбоната калия — 0,6 кг на 1 л воды, р — 1,41 (метод Вольфа). Однако все эти методы по тем или иным причинам также не нашли широкого применения в практике.