Изменчивость возбудителя туберкулеза в организме не свойственного хозяина


В. Ф. РОМАНЕНКО, А. М. ДЯЧЕНКО, В. С. КОЗЛОВ , В. А. МАТУЗЕНКО

Институт сельскохозяйственной микробиологии УААН

Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека, животных и птицы в литературе освещены широко (А. П. Аликаева, 1950; А. Н. Макковейская, 1957; П. Е. Савченко и соавт., 1969; В. И. Ротов и П. Е. Савченко, 1972; И. Г. Урсов и соавт., 1981; К. К. Курманбаев и Д. Б. Балгужинов, 1981; Г. М. Лисиченко, 1986, и др.)Однако мнения ученых в отношении патогенности возбудителей туберкулеза разных видов для не свойственных для них хозяев, их сенсибилизирующих свойств для этих животных очень противоречивы.

До настоящего времени не решены проблемы длительности и характера аллергического состояния животных и птицы, инфицированных не свойственными для них видами микобактерий туберкулеза.

В предыдущем сообщении мы (В. Ф. Романенко и соавт., 1995) привели результаты адаптивной изменчивости М. tuberculosis и М. avium в организме крупного рогатого скота.

Цель нашей работы — изучить патогенность и сенсибилизирующие свойства М. bovis , M . tuberculosis и М. avium на не свойственных для них хозяевах; определить возможность и характер адаптивной изменчивости М. bovis и М. tuberculosis в организме кур и М. avium в организме морских свинок, устойчивых к последним.

С этой целью в 1991—1995 годах на 110 курах провели восемь последовательных пассажей М. tuberculosis (штамм 1848) и М. bovis (штамм 8). Для каждого из них сформировали по четыре группы птиц — 2 опытные (по п-4) и 2 контрольные (по п-4).

Перед опытом кур исследовали внутрикожной туберкулиновой пробой, а в крови крове-капельной реакцией агглютинации (ККРА) определяли наличие антител. Результаты последней были отрицательными.

Кур первой опытной группы заражали суспензией М. tuberculosis однократно внутримышечно в дозе 1 мг, второй — М. bovis внутримышечно в той же дозе, третьей (контроль № 1) — М. avium (штамм 33) внутримышечно в дозе 1 мг, четвертой (контроль № 2) не инфицировали.

Для каждого последующего пассажа использовали реизоляты культур микобактерий соответствующего вида, выделенные от кур после предыдущего пассажа.

Через 3 нед. после первого заражения птиц М. tuberculosis и М. bovis часть кур опытных групп была сенсибилизирована к ППД-туберкулину для птиц, у них отмечали положительные и сомнительные реакции.

В последующих пассажах М. tubercu losis и М. bovis на курах реактогенность первых для птиц возрастала, о чем свидетельствовали результаты внутрикожной пробы на ППД-туберкулин для птиц.

В первом пассаже на ППД-туберкулин для птиц положительно реагировали по одной курице из каждой опытной группы, в третьем — уже по 2 (табл. 1).

Результаты туберкулиновой пробы на птичий аллерген у кур, инфицированных реизолятами М. tuberculosis и М. bovis , в четвертом и пятом последовательных пассажах существенно не отличались от таковых в третьем.

В шестом — восьмом пассажах куры обеих опытных групп, за исключением одной, инфицированной реизолятами М. bovis , реагировали положительно на ППД-туберкулин для птиц.

В то же время чувствительность их к ППД-туберкулину для млекопитающих постепенно ослабевала. В пятом пассаже одна курица из первой группы и 3 из второй реагировали положительно на ППД-туберкулин для млекопитающих. При последующих пассажах наблюдали угасание аллергической реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих вплоть до полного ее исчезновения у кур обеих опытных групп в седьмом пассаже.

Кроме того, критерием антигенных (реактогенных) свойств исследуемых культур микобактерий туберкулеза не свойственных для кур видов служили результаты ККРА о выработке специфических гемагглютининов в их крови. При этом следует отметить, что реакцию ставили пробирочным способом с двумя антигенами: диализиро^ ванным гретым туберкулином для млекопитающих и видоспецифическим антигеном, изготовленным из микобактерий туберкулеза птичьего вида.

При пассировании на курах М, tuberculosis и М. bovis антигенные свойства последних постепенно приобретали таковые М. avium .

В крови птицы обеих опытных групп при первом пассаже М. tuberculosis и М. bovis титр специфических антител к антигену из М. avium достигал 1:200, а у 1 курицы из первой группы — 1:400. В крови птицы контрольной группы № 1 этот показатель был значительно выше — 1:800.

В третьем и последующем пассажах М. tuberculosis положительные результаты ККРА отмечали в разведении 1:400—1:800. Уровень гемагглютининов в крови кур, зараженных в третьем — шестом пассажах реизолятами М. bovis , был несколько ниже и составлял 1:400. Но уже в седьмом пассаже он был 1:400—1:800, то есть достигал титра гемагглютининов в крови кур, инфицированных М. avium .

Каждый пассаж микобактерий длился 3 мес, после этого всех кур убивали и проводили патологоанатомические и бактериологические исследования.

У 2 птиц первой группы при патолого’анатомическом исследовании установили уже в первом пассаже единичные туберкулезные очажки в печени и у 1 из второй группы выявили туберкулы в илеоцекальном соединении кишечника.

При последующих пассажах М. tuber culosis и М. bovis патогенность их для кур усилилась, особенно М. bovis . В четвертом пассаже М. bovis у 3 птиц из 4 обусловила специфические туберкулезные поражения печени и у 1 — кишечника, в пятом вызвала гибель 1 курицы до окончания срока опыта. При пятикратном пассировании на курах М. tuberculosis и М. bovis регистрировали кахексию зараженной ими птицы.

В шестом — восьмом пассажах М. tuberculosis и М. bovis вызывали у кур туберкулезные поражения печени (туберкулы размером от макового зерна до конгломератов неправильной формы) и кишечника, неспецифические изменения — геморрагии на почках и в легких, а также частичное или полное истощение зараженной птицы.

При бактериологическом исследовании проб патологического материала от убитых по окончании каждого опыта или павших кур, инфицированных М. tuberculosis и М. bovis на питательной среде Левенштейна — Иенсена выделили культуры кислотоустойчивых микобактерий. У последних изучали культурально-морфологические и биохимические свойства. Для этого реизолиро- ванные культуры микобактерий выращивали при 22, 37—38 и 41 °С, учитывая скорость и характер их роста, морфологию колоний, пигментацию и суспендируемость.

Сравнивая основные свойства реизо- лятов М. tuberculosis и М. bovis после каждого из восьми последовательных пассажей на курах с таковыми исходных культур, установили: М. tuberculosis в первом пассаже регистрировали едва заметный рост при 22 "С, а после третьего и каждого последующего их рост при 22 и 41 °С был более выраженным, в то время как исходная культура при таких режимах не росла;

после третьего пассажа наблюдали ускорение появления первичного роста, по сравнению с исходной культурой он проявлялся на 9 дней раньше, в четвертом — на 4 и в последующих — на 10 дней раньше;

после третьего и более пассажей колонии реизолятов приобретали светло-кремовый цвет, а у исходной культуры он был белый;

у пятикратно пассированной культуры на среде Левенштейна—Иенсена кроме R -колоний появлялись S -формы

мягкой консистенции, чего не наблюдали у исходной;

многократно пассированная в организме кур культура обладала хорошей суспендируемостью.

М. bovis

постепенное ускорение роста выделенных реизолятов по сравнению с исходной, в третьем пассаже первичный рост появлялся на 14 дней раньше, в четвертом — на 9—10 и начиная с шестого — на 13—15 дней раньше;

ослабление уреазной активности начиная с четвертого пассажа.

Культуры М. tuberculosis и М. bovis при восьмикратном последовательном пассировании на курах изменили свои биологические свойства. Они вызывали гибель кроликов в течение 14—21 дня с резким увеличением селезенки (тип Йерсена), что характерно для М. avium . Полученные результаты свидетельствуют о том, что М. tuberculosis (штамм 1848) и М. bovis (штамм 8) при восьмикратном пассировании через организм кур потеряли некоторые характерные для них свойства и приобрели таковые, типичные для М. avium .

Опыты на морских свинках

На 88 морских свинках провели восемь последовательных пассажей М. avium (штамм 33), контролем служила М. tuberculosis (штамм 1848). Для каждого пассажа формировали по три группы по 4 животных в каждой.

Морским свинкам первой (опытной) группы вводили суспензию М. avium (штамм 33) подкожно в дозе 1 мг в область паха; второй (контроль № 1) — М. tuberculosis (штамм 1848) тем же способом и в той же дозе. Животных третьей группы не инфицировали (контроль № 2).

В последующих пассажах морских свинок заражали реизолятами микобактерий соответствующего штамма, выделенными после предыдущего пассажа возбудителя на этих животных.

Через 3 нед и спустя 3 мес после первичного заражения животных аллергически исследовали ППД-туберку- лином для млекопитающих и ППД-ту- беркулином для птиц.

М. avium в первом пассаже через 3 нед после заражения не сенсибилизировала животных ни к одному туберкулину (табл. 2).

Через 3 мес после первого заражения животных М. avium у них наблюдали положительные реакции на ППД-туберкулин для птиц. С увеличением количеств пассажей отмечали усиление чувствительности морских свинок к ППД-туберкулину для млекопитающих.

Так, если в первом пассаже ни одно из подопытных животных не реагировало положительно на ППД-туберкулин для млекопитающих, то уже во втором — третьем пассажах у половины морских свинок наблюдали положительные реакции на этот туберкулин.

В третьем пассаже реизолят М. avium вызывал положительную реакцию на ППД-туберкулин для млекопитающих у 2 морских свинок и сомнительную у 1 (табл. 3). После четвертого пассажа положительно реагировали на ППД-туберкулин для млекопитающих уже 3 из 4 взятых в опыт животных.

Следовательно, при пассировании М. avium на морских свинках у животных постепенно угасали реакции на ППД-туберкулин для птиц и усиливались на ППД-туберкулин для млекопитающих.

В пятом пассаже морских свинок не удалось исследовать аллергически, так как в течение месяца все они погибли от генерализованной формы туберкулеза.

В шестом — восьмом последовательных пассажах М. avium на морских свинках, не погибших до окончания опыта, выявили четкие положительные реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих.

С увеличением числа пассажей М. avium на морских свинках усиливалась патогенность возбудителя для этих животных. Если в первом пассаже только у 1 морской свинки опытной группы в легких обнаружены единичные туберкулы, то во втором — четвертом выявили множественные туберкулы в паренхиме легких, а также гиперпластические изменения в селезенке и почках. В пятом пассаже все морские свинки опытной группы пали от генерализованной формы туберкулеза на 28—36-е сутки после заражения. В шестом погибли 2 морские свинки из 4 на 42-е сутки от генерализованной формы туберкулеза, а у 2 других после убоя наблюдали на поверхности и разрезе печени, селезенки и легких множественные серовато-белые и желтовато-белые туберкулезные узелки разной формы и величины.

В последующих двух пассажах у погибших и вынужденно убитых животных наблюдали генерализованную форму туберкулеза.

После каждого пассажа на животных у выделенных культур микобактерий изучали основные культурально-морфо- логические и биохимические свойства.

При выращивании реизолятов М. avium при 22, 37-38 и 41 "С установили, что интенсивность их роста на питательной среде Левенштейна—Иенсена изменялась. После первого пассирования на морских свинках культура совсем не росла при 22 °С, в то время как исходная при этой температуре проявляла слабый рост.

Начиная со второго пассажа М. avium на среде Левенштейна-Иенсена наблюдали постепенное замедление роста и изменение его характера (вместо сплошного роста у исходной культуры у исследуемых микобактерий регистрировали обособленные мелкие колонии).

Культура М. avium , трижды пассированная через организм морских свинок, не росла при 22 °С и ослабила интенсивность роста при 41 °С, в то время как исходная слабо росла при 22 "С и умеренно при 41 "С (табл. 4).

После третьего пассажа М. avium на морских свинках первичный рост культуры отмечали на 19—22-й день, по времени это совпадало со сроками первичного роста М. tuberculosis (штамм 1848).

У трижды пассированной на морских свинках М. avium появились потерявшие блеск R -формы колоний.

При изучении ферментативных свойств М. avium , выделенной после четвертого парсажа, наблюдали проявление уреазной активности, что не свойственно для этого возбудителя.

Появление первичного роста культуры на 9—11 дней позже в сравнении с исходной М. avium , постепенное снижение интенсивности роста до полной потери при 22 и 41 °С, изменение его характера, проявление уреазной активности — все эти признаки сохранялись и при последующих пассажах культуры на морских свинках.

Восьмикратно пассированная на морских свинках М. avium не вызывала изменений туберкулезного характера во внутренних органах кур, однако обусловливала генерализованную

форму туберкулеза у морских свинок с летальным исходом.

Заключение, Все три вида возбудителя туберкулеза (М. tuberculosis , M . bovis , M . avium ) не обладают абсолютной константностью своих свойств. При длительном пребывании в организме не свойственного хозяина типично патогенные микобактерий туберкулеза с устойчиво сложившимися биологическими признаками теряют ряд исходных свойств и постепенно приобретают новые, включая и видовые, характерные для возбудителя туберкулеза, специфического для животных, через организм которых они пассировались.

М . tuberculosis, M. bovis и М . avium сенсибилизируют организм не свойственного им хозяина, обусловливают высокий титр специфических антител в их крови и, постепенно адаптируясь, вызывают у них заболевание, сопровождающееся характерными патологическими изменениями, и даже генерализованную форму туберкулеза. Мы считаем, что все три вида микобактерий туберкулеза — производные его

единого возбудителя, возникшие в результате длительного естественного эволюционного процесса и их адаптации к определенному виду животных, птице или человеку.

ЛИТЕРАТУРА

1. Курманбаев К. К., Балгужинов Д. В. // Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных. Алма-Ата, 1981.

2. Лисиченко Г. М. // Сборник рефератов НИР и ОКР. 1986. № 8. Серия 5.

3. Маккавейская А. Н. // Тезисы докладов конф. по борьбе с туберкулезом сельскохозяйственных животных и птиц. Институт микробиологии АН Лит. ССР. Рига, 1957.

4. Романенко В. Ф. и др. // Ветеринария. 1995. № 12.

5. Ротов В. И., Савченко П. Е. // Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных. Алма-Ата, 1972.

6. Савченко П. Е. и др. // Профилактика и лечение кавернозных форм туберкулеза легких. Чернигов, 1969.

7. Урсов И. Г. и др. // Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных. Алма-Ата, 1981. Variability of tuberculosis agent in an organism of an improper host V. F. Romanenko, A. M. Diachenko J V. S. Kozlov, V. A. Matuzenko.

While prolonged staying in an organism of an improper host, typical pathogenic mycobacteria of tuberculosis with steadily established biological traits loose a number of initial properties and gradually gain the new ones, including those peculiar to species of tuberculosis agents specific to the animals through whose organisms they have been passed.

Оставить комментарий

avatar
Photo and Image Files
 
 
 
Audio and Video Files
 
 
 
Other File Types
 
 
 
  Подписаться  
Уведомление о