Н. К. БУКОВА ВГНКИ — A. А. ФАЙЗУЛЛИН, А. К. ГАЛИУЛЛИН, Л. А. МЕЛЬНИКОВА — ВНИВИ, B. П. БЫКОВ, М. И. ЕВДОКИМОВА, Н. С. ПАВЛОВ Ветотдел Астраханской области
К сапу восприимчивы лошади, ослы, мулы и другие представители этого семейства, вызывает его Pseudomonas mallei. В природных условиях сапом могут заразиться хищники семейства кошачьих ( при поедании мяса больных животных ), а также верблюды и человек.
Диагноз на сап устанавливают, используя комплекс данных, включающих клинический осмотр, эпизоотологические, аллергические, серологические, патологоанатомические, бактериологические и гистологические тесты.
Подозрение на сап вызывают следующие болезни : эпизоотический лимфангит (африканский сап, бластомикоз); язвенный лимфангит; мыт; мелиоидоз (ложный сап, сап Рангуна и т. п.); туберкулез; пиемические процессы; петехиальная горячка; хронический катар воздухоносных мешков, лобной и верхнечелюстной пазух; повреждения слизистой носовой полости, связанные с травмами и рубцами, злокачественными опухолями или личинками овода. При этом у животных могут возникать сходные с сапом клинические признаки : кашель, истощение, носовое истечение, язвы, рубцы, опухание подчелюстных лимфатических узлов и др. [3].
Дифференцирующими признаками при возникновении этих болезней, являются отрицательные результаты маллеиновой пробы и серологических исследований на сап; обнаружение Cryptococcus farciminosus в содержи мом абсцессов при эпизоотическом лимфангите; наличие Streptococcus equi в гное при мыте; Corynebacterium pseudotuberculosis при язвенном лимфангите; положительные результаты туберкулинизации, а также бактериологическое и гистологическое исследование узелковых поражений, обнаруженных в органах при туберкулезе; биопроба на кроликах, которые при заражении возбудителем Р., pseudomallei погибают на 2 — 3- й сутки, а Р. mallei — выживают [1, 4].
У лошади с клиническими признаками, сходными с сапом, и сомнительными результатами глазной маллеинизации и серологических реакций, выделили В. pse, udptubercufosis r rodentium. По современной номенклатуре этот возбудитель называется Yersinia pseudotuberculosis [8].
Цель настоящей работы — уточнение диагноза на сап двух лошадей в Астраханской области, предварительно поставленного областной ветеринарной службой на основании ветеринарносанитарной экспертизы туш убитых животных и результатов лабораторных исследований.
При вскрытии лошадей обнаружили множественные узелки величиной с горошину в легких и печени. Изменений на носовой перегородке, гортани, глотке, трахее, а также в подчелюстных, заглоточных, бронхиальных, средостенных лимфатических узлах и на коже не наблюдали.
При микроскопии мазков культур из органов, полученных на МПА и МПБ, регистрировали большое количество грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, разнообразных по форме и сходных с возбудителем сапа. В РА на стекле эти культуры реагировали с контрольной сапной сывороткой, взятой в разведении от 1:2 до 1:8.
После ознакомления с материалами, представленными ветотделом, у членов комиссии Департамента ветеринарии возникли сомнения в правильности поставленного диагноза. Поэтому они дополнительно исследовали выделенные культуры, наиболее схожие с возбудителем сапа по культуральным свойствам.
Материалы и методы. Выделенную смесь культур пересевали на чашки Петри с МПГА методом предельных разведений для получения чистой культуры.
Культуральные свойства изолята проверяли посевом на МПГА, МПГБ и картофельную среду Павловского; тинкториальные и морфологические — микроскопией мазков, окрашенных по Граму; подвижность — в висячей капле; агглютинабельные — в РА на стекле с адсорбированной сапной сывороткой, изготовленной ВНИВИ. РА ставили общепринятым методом.
Изолят идентифицировали методом иммуноферментного анализа ( ИФА ) с использованием иммунопероксидазного сапомелиоидозного конъюгата, изготовленного ВНИВИ. Контролем служили антигены из культур возбудителей сапа штамма 5584/24- Зх и мелиоидоза штамма С -141, инактивированных гаммаоблучением. ИФА ставили прямым вариантом в одноразовых полистироловых планшетах с адсорбцией испытуемых и контрольных антигенов на твердую фазу.
Патогенность культуры проверяли при введении ее самцам морских свинок внутрибрюшинно в объеме 1,5 мл для получения скротального эффекта ( феномена Штрауса ), а также хомячкам подкожно в область затылка в том же объеме.
На 9- е сутки после заражения морских свинок усыпляли хлороформом и вскрывали. Кровь и пульпу из сердца, печени, селезенки, легких, почек и семенников высевали на МПГА и МПГБ, инкубировали 3 сут при 37 — 38 *С.
На 6- е сутки после заражения осматривали, усыпляли и вскрывали хомячков.
В РСК и пластинчатой РА с сапным цветным антигеном, разработанным коллективом авторов ВГНКИ, Курской биофабрики и Бурятского СХИ, исследовали 526 проб сыворотки крови лошадей двух районов, на которые были наложены ограничения. В качестве контроля использовали сапную сыворотку для РСК Курской биофабрики и гипериммунную мелиоидозную сыворотку ВНИВИ.
Для подтверждения предположения о принадлежности выделенного изолята к Yersinia pseudotuberculosis дополнительно провели :
культивирование возбудителя при 8″ С для определения подвижности. Известно, что возбудитель псевдотуберкулеза, выращенный при 4 — 29 °С, подвижен и имеет 6 — 10 жгутиков. При 30 °С жгутики атрофируются и подвижность бактерий исчезает [6];
посев на чашки Петри с кровяным агаром для изучения характера роста [5];
изучение серологических свойств в реакции торможения непрямой гемагглютинации ( РТНГА ) с использованием диагностикума псевдотуберкулезного эритроцитарного, изготовленного Ленинградским НИИ вакцин и сывороток. По мнению специалистов, РТНГА является чрезвычайно чувствительным и универсальным методом, так как позволяет выявлять возбудитель псевдотуберкулеза в любых биологических объектах и во внешней среде [5], имея значительное преимущество перед бактериологическим анализом [7].
Результаты исследований и обсуждение. На чашках Петри с МПГА выделили чистую культуру, вызывающую в МПГБ помутнение и образование плотного осадка, на МПГА — обильный рост полупрозрачных колоний серожелтого цвета без перламутрового отлива, слизистых, гладких, с ровными краями, единичных и сливающихся в сплошной налет; на картофельной среде Павловского — рост в виде желтоватобелого налета.
Испытуемая культура по культуральным свойствам отличалась от возбудителя сапа, который вызывает помутнение бульона с образованием пленки и пристеночного кольца ( большинство штаммов ), а также осадка, поднимающегося штопором при встряхивании; на агаре растет в виде сероватобелых полупрозрачных гладких колоний с перламутровым оттенком, сливающихся в сплошной налет, а на картофельной среде Павловского — в виде блестящих гладких колоний цвета меда, также сливающихся и темнеющих со временем.
По тинкториальным и морфологическим свойствам культура была представлена грамотрицательными короткими толстыми палочками с зернистыми включениями, лежащими одиночно и небольшими цепочками. Возбудитель сапа по Граму также не красится, представляет собой зернистые палочки, однако они несколько тоньше и длиннее.
В висячей капле клетки оказались неподвижными, с еле заметным броуновским движением, у возбудителя сапа оно бывает очень интенсивным.
В РА на стекле с адсорбированной сапной сывороткой и прямом ИФА с иммунопероксидазным сапомелиоидозным конъюгатом испытуемая культура не реагировала.
При вскрытии морских свинок патологоанатомических изменений и феномена Штрауса не наблюдали, а при инкубировании материала от них не регистрировали роста микрофлоры.
При осмотре и вскрытии хомячков клинических признаков сапа и поражений внутренних органов не обнаружили.
Отрицательный результат получили также при исследовании 526 проб сыворотки крови лошадей в РСК и пластинчатой РА с сапным цветным антигеном.
На основании нехарактерных для возбудителя сапа культуральных и серологических свойств, отсутствия патогенности испытуемой культуры для морских свинок и хомячков предварительный диагноз ( сап ) не подтвердили.
По культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам испытуемая культура близка к возбудителю Y. pseudotuberculosis, это и подтвердили дополнительные тесты.
В некоторых пробирках при культивировании возбудителя на МПГА при 8 » С наблюдали разрыв агара; в висячей капле обнаружили частично подвижную культуру.
На кровяном агаре получили обильный рост слизистых колоний серобелого цвета, распространяющихся за пределы посева петлей ( ползущий рост ).
В РТНГА испытуемая культура давала положительные результаты с сывороткой против Y. pseudotuberculosis и частично — с сывороткой против Y. enterocolitica. Возбудитель псевдотуберкулеза широко распространен в природе, его выделяли из органов и фекалий 175 видов млекопитающих ( в том числе лошадей ), 124 видов птиц, 4 видов пресмыкающихся, 7 видов рыб, а также смывов с овощей, корнеплодов, из фуража, почвы, пыли, воздуха и воды [2, 5].
Клинически болезнь проявлялась нарушением общего состояния, одышкой, отказом от пищи и воды, истечением слизи из носа, сонливостью, малоподвижностью или беспокойством, взъерошенностью шерсти или перьев, нарушением равновесия, истощением [5], что в основных чертах совпадало с клиническими признаками сапа.
При патологоанатомическом исследовании септической формы псевдотуберкулеза многие ученые находили мелкие некротические или абсцессоподобные узелки сероватобелого цвета в печени, селезенке, легких [9, 10], похожие на обнаруженные в печени и легких убитых лошадей. Такие узелки или некротические гранулемы, характерные для псевдотуберкулеза, могут быть и при сапе.
На основании оценки эпизоотологических данных и результатов изучения свойств выделенной от лошадей культуры комиссия идентифицировала ее как Yersinia pseudotuberculosis.
В связи с постановкой такого диагноза члены комиссии рекомендовали провести дератизацию в районах, где находились эти лошади, так как к возбудителю псевдотуберкулеза особенно чувствительны грызуны [5].
Заключение По данным бактериологических и серологических исследований культур, выделенных от двух лошадей, подозреваемых в заражении сапом, установили, что изменения, сходные с сапными, вызывала Yersinia pseudotuberculosis.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ипатенко Н. Г. // Малоизвестные заразные болезни животных. — М.: Колос, 1973. 2. Кузнецов В. Г. // Тезисы Всесоюзной научнопрактической конференции. — Владивосток, 1986. 3. Лазарев П. С. // Инфекционные и инвазионные болезни лошадей— М.: Колос, 1976. 4. Петренко А. К. // Инфекционные и инвазионные болезни лошадей. — М.: Колос, 1976. 5. Сомов Г. П. и др. // Псевдотуберкулез. — М.: Медицина, 1990. 6. Тимченко Н. Ф. и др. // Природноочаговые болезни Сибири и Дальнего Востока. — Новосибирск, 1984. 7. Ценева Г. Я. и др. // Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза. 1984. № 1. 8. Bierbaum R., Eberbeck E. // Zschr. fur Veterkd. 1918. 1. 9. Chum С. et al. // Medicine (Baltimore). 1980. 59. 1. 10. Gundersen Т., Neess H. C. // Acta path, microbiol. 1981. 89. 2.
Establishment of a difinitive diagnosis in horses suspected in glanders disease
N. K. Bukova, A. A. Faizullin, A. K. Galiullin, L A. Melnikova, V. P. Bikov, M. I. Evdokimova, N. S. Pavlov
With help of complex bacteriological and serological investigations of cultures, isolated from two horses, suspected in glanders disease, it was established, that clinical manifestations, which resemle glanders changes, were due to Yersinia pseudotuberculosis.