Возбудитель лептоспироза


Лептоспиры вызывают лептоспироз — инфекционную природно-очаговую болезнь животных и человека, характеризующуюся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Болезнь может протекать бессимптомно. Возбудителя открыли Инад и Идо в 1914—1915 гг.

Лептоспиры относятся к семейству Leptospiraceae (leptos — тонкий, speira — виток, спираль) и роду Leptospira, который включает два вида: патогенный — L. interrogans — и сапрофитический — L. biflexa. Патогенный вид представлен 183 сероварами, которые по составу антигенов объединены в 25 серологических групп.

В инфекционной патологии животных наибольшее значение имеют серогруппы: Pomona, Tarassovi, Hebdomadis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola.

Морфология. Лептоспиры — спиралевидные бактерии диаметром

0,1—0,25 и длиной 6—15— 30 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1—2 вторичных, придающих клетке форму букв Г, S, С. Осевая нить состоит из двух фибрилл. В темном поле они имеют вид тонких, серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами (рис. 21). У клеток некоторых штаммов концы прямые (бескрючковые лептоспиры).

Для лептоспир характерна активная подвижность. Главный тип движения — вращательнопоступательный. Спор не образуют. Грамотрицательны, плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому — Гимзе — в красный цвет, но фиксация резко изменяет их морфологию; используют также метод импрегнации серебром по Левадити.

Культивирование. Лептоспиры — хемоорганотрофные факультативноанаэробные бактерии. Культивируют их в аэробных условиях при температуре 28—30 °С на специальных средах, содержащих 5—10 % сыворотки кролика или овцы, дистиллированную, водопроводную, колодезную воду или фосфатный буфер (рН 7,2— 7,6). К ним относятся среды: Уленгута, Терских, Ферворта — Вольфа, Любашенко и др. Размножение лептоспир обычно начинается через 7—20 дней, иногда 1—2 мес. Среда при этом не изменяется и наличие роста определяют микроскопией в темном поле. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S, О и R-форм. S-Форма — типичная вирулентная, ее колонии прозрачные, в виде диска с ровным краем.

Биохимические свойства. Изучены недостаточно. Ферментация углеводов не доказана; обнаружены каталаза, оксидаза, липаза и др.

Токсинообразование. Истинный экзотоксин лептоспиры не синтезируют. Они обладают эндотоксином и ферментами патогенности: гемолизинами, фибринолизином, плазмокоагулазой, гиалуронидазой, липазой, лецитиназой, которые выделяются в результате лизиса лептоспир. Вирулентными являются свежевыделенные штаммы лептоспир, при культивировании же на питательных средах это свойство относительно быстро теряется.

Антигенная структура. Лептоспиры обладают общим белковым соматическим антигеном, определяющим их видовую специфичность. Поверхностные полиса харидные антигены служат критериями групповой и серовариантной дифференциации. Антигенные свойства лептоспир изучают в реакции микроагглютинации и методом иммуноадсорбционного анализа.

Устойчивость. В воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются от 7 до 30 дней и более; будучи типичными гидрофилами, в почве, перенасыщенной водой, выживают до 280 дней; в свежем молоке — 8—24 ч; в почках убойных животных при температуре 0—4 °С — до 28 дней; в замороженном мясе погибают через 10 дней. Чувствительны к действию поваренной соли; в засоленном (4,8 % NaCl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 дней; в гипертоническом растворе поваренной соли (2,8 %) — через 15 мин.

При кипячении погибают моментально, при 56—58 °С — в течение 25—30 мин. Быстро гибнут при высушивании и под воздействием прямого солнечного света. Растворы (0,1 %-ный соляной кислоты, 0,5 %-ный фенола) инактивируют лептоспиры за 20 мин.

Патогенность. К лептоспирозу наиболее восприимчивы крупный рогатый скот (серогруппы помона и гебдомадис), свиньи (серогруппы помона и тарассови), лисицы, песцы, менее — лошади, козы, овцы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры. Болеет и человек. Основными носителями лептоспир в природных очагах являются: серые и водяные полевки, серые крысы, домовые мыши, землеройки.

К экспериментальному заражению наиболее чувствительны золотистые хомячки, крольчата-сосунки и молодые морские свинки.

Патогенез. Входными воротами возбудителя являются поврежденные кожа и слизистые оболочки. Патогенные лептоспиры благодаря активной подвижности преодолевают защитные барьеры организма и быстро проникают в кровь. Через 12 ч после заражения они обнаруживаются в печени. Затем наступает генерализация инфекции (лептоспиремия), появляется лихорадка, увеличивается число лептоспор в печени, почках, надпочечниках, селезенке, легких. К этому времени образуются антитела. Они разрушают лептоспиры, и происходит их элиминация из крови и паренхиматозных органов. В почечных же клубочках и канальцах лептоспиры недоступны воздействию антител, где они активно размножаются и выделяются с мочой. Почечная недостаточность у кошек и других видов животных часто связано с явным или скрытым носительством лептоспир, поражающих, прежде всего, урологическую сферу у животных.

Лизис лептоспир сопровождается накоплением токсических веществ, под действием которых повышается проницаемость сосудов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, развиваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: кровь (лучше брать на 3—5й день болезни при повышенной температуре тела), моча, кусочки паренхиматозных органов, почка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирается не позже 2 ч после гибели животного. Моча собирается при естественном мочеиспускании и в летнее время исследуется в течение 3 ч.

Микроскопия. Исследуют мочу, цитратную кровь, тканевую суспензию (корковый слой почки, печень, у плода — из всех органов). Микроскопию проводят в раздавленной капле с конденсором «темного поля». Типичные лептоспиры активно подвижны и имеют форму прямой или S-образной с загнутыми в виде крючков концами серебристо-белой нити. Лептоспир также можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации серебром по методу Левадити.

Выделение культур. Материал засевают по 1—3 капли в 3—5 пробирок со специальной питательной средой и инкубируют при температуре 28—30 °С в течение 3 мес. Лептоспиры начинают размножаться через 7—20 дней, иногда через 1—2 и очень редко — 3 мес. Наличие роста определяют темно-польной микроскопией раздавленных капель, которые готовят через 3, 5, 7, 10 дней и далее через каждые 5 дней. При обнаружении размножения лептоспир делают пересев в 3—5 пробирок со свежей средой. Получить культуры лептоспир удается не всегда.

Биологическая проба. Метод более чувствительный, чем культуральный; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения их вирулентности и дифференциации от сапрофитов.

Заражают золотистых хомячков 20—30-дневного возраста и крольчат-сосунов в возрасте 10—20 дней. На каждую пробу берут двух животных; на 4—5й день убивают первого, на 14—16й день — второго, если оно не погибло раньше. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы. Сыворотку крови убитого через 14—16 дней животного исследуют в реакции микроагглютинации (РМА) с лептоспирами 13 серогрупп. Положительная РМА в разведении 1:10 и выше указывает на наличие лептоспир в исследуемом материале.

Серологическое исследование. Для серологической диагностики лептоспироза используют РМА и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5—7й день болезни и при исследовании отдельных животных повторно через 7—10 дней. Необходимо помнить, что антитела в крови у выздоровевших животных могут сохраняться до двух и более лет.

РМА ставят в лунках агглютинационных пластинок из плексигласа. В качестве антигенов берут живые 5—15суточные культуры лептоспир 13—16-й серогрупп. Сыворотку исследуют с антигенами каждой серогруппы в разведениях 1:100, 1:500, 1:2500; при необходимости реакцию ставят в разведениях 1:10.0, 1:200 и т. д. до титра. В лунки вносится по 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл антигена. Контролем служит антиген с физиологическим раствором по 0,1 мл. Реакцию выдерживают при температуре 30 °С в течение 1 ч и учитывают ее результаты в препаратах раздавленная капля в микроскопе с конденсором темного поля. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», состоящих из 3—5, нескольких десятков и более бактерий. Свободные концы лептоспир сохраняют подвижность. Оценивается реакция в плюсах по 4балльной системе. Положительной считают реакцию не менее чем два плюса при отсутствии агглютинации в контроле.

РА ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят каплю разведенной 1:100 исследуемой сыворотки и добавляют равное количество антигена. Лептоспирозные антигены для РА выпускаются шести серогрупп (для каждой отдельно) и представляют собой концентрированную взвесь лептоспир в альбуминовой питательной среде. При наличии в сыворотке специфических антител наступает агглютинация. Оценка результатов производится в плюсах по 4балльной системе. Положительной считают реакцию в два плюса и выше, сомнительной — в один плюс.

Для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммунофлюоресцентный метод.

Иммунитет и средства специфической профилактики. После переболевания у животных формируется длительный и напряженный иммунитет. Он характеризуется серовариантной специфичностью, поэтому возможны реинфекции. Ведущее значение в невосприимчивости к лептоспирозу принадлежит антителам, и особенно IgG. Сыворотки иммунных животных обладают превентивными свойствами. Отмечается также длительное лептоспироносительство и вследствие этого инфекционный иммунитет.

При вакцинации коров за 1,5—4 мес, овец и свиноматок за 1,5—2 мес до родов колостральный иммунитет продолжается у телят до 2,5 мес, у ягнят и поросят — до 1,5 мес.

Для активной иммунизации применяют депонированную поливалентную вакцину ВГНКИ против лептоспироза животных. Вакцину выпускают в двух вариантах: первый — изготовляют вакцину из штаммов лептоспир серогрупп помона, тарассови, иктерогеморрагия и каникола, второй — из серогрупп помона, тарассови, гриппотифоза и четырех сероваров группы гебдомадис. Иммунитет после вакцинации наступает через 14—20 дней и длится у молодняка до 6 мес, у взрослых животных — до 1 года.

Для пассивной иммунизации и лечения больных животных используют сыворотку против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных, которую получают из крови воловпродуцентов, гипериммунизированных культурами лептоспир. Иммунитет у животных, привитых сывороткой, сохраняется 10—14 дней.

Оставить комментарий

avatar
Photo and Image Files
 
 
 
Audio and Video Files
 
 
 
Other File Types
 
 
 
  Подписаться  
Уведомление о